Musik Hallo. Heute möchte ich erklären,
wie wir im Labor pipetieren und möchte einige Tipps und Hinweise geben,
was man falsch machen kann und wie man Fehler vermeiden kann.
Wir haben im Labor vier Standard-Pipetten, mit denen wir die meiste Zeit pipetieren.
Und das sind einmal 100 bis 1000 Mykuliter, 20 bis 200 Mikuliter,
2 bis 20 Mykuliter und 0,5 bis 10 Mykuliter.
Mit diesen vier Pipetten kann man eigentlich die meisten arbeiten,
erledigen. Es gibt aber auch Spezial-Keyphetten. Zum Beispiel
kann man mit dieser Pipette sogar nur 0,1 Mykoliter pipetieren,
während man mit so einer großen Pipette sogar 5 Milliliter pipetieren kann.
5.000 Mykoliter. Noch ein Wort zur Auswahl der Pipette.
Wir haben gesehen, dass sich die Volumenbereiche verschiedener Pipetten überlagern. Wie gesagt,
mit dieser Pipette kann man zwischen 20 und 200 Mykoliter,
mit dieser zwischen 100 und 1.000 Mykoliter pipetieren.
Welche Pipette nehmen wir jetzt, wenn wir 150 Mykoliter
pipetieren wollen
Und da gilt die Faustträge,
wir wollen die Pipette nehmen, indem unser Volumen,
was wir präpritieren wollen, im oberen Bereich dieses Volumenbereiches ist.
Also in dem Fall 1050 Mikroliter, pepetieren wir mit der
200 Mikroliter Pipette. Jede Pipette hat dieses Drehrad,
mit dem man das Volumen einstellen kann. Darauf muss man achten,
und dabei muss man achten,
dass man nicht unter das Minimalvolumen und nicht über das Maximalvolumen,
was hier gekennzeichnet ist,
hinausdreht,
weil sonst
die Mechanik kaputt geht
Noch ein Hinweis, einige Pipetten haben spezielle Mechanismen,
um das eingestellte Volumen zu fixieren.
Zum Beispiel hier gibt es dieses Drehrad, was man erst lösen muss,
bevor man das Volumen einstellt und danach wieder fixiert.
Und bei anderen Pipetten muss man den Stempel rausziehen,
kann dann das Volumen einstellen und sichert es dann wieder durch Reindrücken des Stempels.
Ein wichtiger Punkt ist noch, die Anzeige, wir haben hier zwei Pipetten,
die auch ziemlich ähnlich aussehen, die aber unterschiedliche Volumenbereiche pipetieren können
Und wir sehen diesen Querstrich hier. Dieser Querstrich ist ein Dezimalstrich
sozusagen. Und 0-7-5-0,
bei dieser Pipette bedeutet 7,5 Mykoliter, während 0-7
-5-0 bei dieser Pipette 75 Mykoliter bedeutet.
Das heißt, immer darauf achten, mit welchen Volumenbereich
wir arbeiten und wo der Dezimalstrich an der Anzeige ist.
Auf jede Pipette passt eine Spitze, die farblich auch zu
Pipette passt. Das heißt, Blauspitzen für blaue Pipetten,
gelbe, für gelbe Pipetten und weiße Spitzen für weiße Pipetten
Wir nehmen uns also jetzt zum Pipetieren eine Spitze,
die kann steril sein zum Beispiel, nehmen uns unsere Flüssigkeit.
Und jetzt hat jede Pipette zwei Druckpunkte.
Das ist der erste Druckpunkt, das ist der zweite Druckpunkt.
Um Flüssigkeiten in die Pipettenspitze zu saugen,
drücken wir den Stempel bis zum ersten Druckpunkt,
gehen in die Flüssigkeit und lassen den Stempel langsam nach oben kommen.
Jetzt haben wir das eingestellte Volumen in der Pipette und um es wieder abzugeben,
drücken wir den Stempel wieder bis zum ersten Druckpunkt.
Dabei verbleibt ein kleiner Rest in der Pipettenspitze.
Und auch diesen Rest aus der Pipettenspitze zu bekommen,
drücken wir weiter bis zum zweiten Druckpunkt und es wird ein bisschen Luft nachgeschoben.
Und dadurch wird die Pipettenspitze komplett leer. Und wir haben
das komplette Volumen pipetiert. Ihr habt eben gesehen,
dass es einen Abwurfknopf gibt,
mit dem man gebrauchte Pipettenspitzen einfach in den Müll werfen kann.
Es ist empfehlenswert vor dem Beginn der Arbeit,
die Pipette auf ihre Genauigkeit zu überprüfen.
Was wir dafür brauchen,
ist eine Feinwaage und Wasser
Und in unserem Beispiel wollen wir testen,
wie genau diese 1 Milliliter Pipette ist.
Dafür nehmen wir 1000 Mikuliter Wasser. Die
rein theoretisch genau ein Gramm wiegen sollten.
Wir messen 0,1,001 Gramm
Und wie immer in der Wissenschaft machen Messungen nur Sinn,
wenn man sie wiederholt. Das habe ich im Vorfeld getan.
Und nun können wir aus drei Werten einen Mittelwert bilden.
Und erhalten 1,001 Gramm. Das heißt,
wir haben einen Fehler von unter einem Prozent.
Ich möchte gerne nochmal einen Hinweis zum Pipetieren geben.
Und zwar, wenn wir Flüssigkeiten aufsaugen mit der Pipette,
am ersten Druckpunkt sind, in der Flüssigkeit sind,
dann bitte immer langsam den Stempel nach oben kommen lassen
Wenn wir den Stempel sehr schnell kommen lassen,
dann sprudelt die Flüssigkeit in die Pipettenspitze hinein und gegebenenfalls
auch in die Pipetto und verschmutzt diese von innen.
Und diese Verschmutzung in Innen sind schwer zu reinigen.
Nichtsdestotrotz kann es immer passieren, dass die Pipetten von außen beschmutzt werden.
Und um euren Kommilitonen oder Kollegen eine saubere Pipette zu übergeben,
ist es wichtig, solche Verschmutzungen immer direkt nach der Arbeit zu reinigen.
Entweder mit Wasser oder wenn es härtere Verschmutzungen sind mit
Ether Null
Und die saubere Pipette wird nach der Arbeit hängend in einem solchen Pipettenständer gelagert.
Ich möchte noch einige Tipps zum Pipetieren von gerade kleinen Volumina
geben. Bei kleinen Volumina hat man häufig das Problem,
dass wenn man in die Luft pipetiert,
der Tropfen an der Pipettenspitze hängen bleibt und nicht in
das Gefäß geht,
indem man
den Tropfen eigentlich haben möchte
Darum gibt es zwei Möglichkeiten, das zu verhindern.
Möglichkeit eins ist, den Tropfen direkt an die Gefäßwand
zu pipetieren. Der Vorteil dieser Methode ist,
dass gerade wenn man mehrere Sachen pipetieren muss,
man sehr einfach kontrollieren kann, ob alle Reagenzen im Reaktionsgefäß sind.
Variante zwei ist, dass man das kleine Volumen in ein
größeres Volumen
hinein pipetiert
Dabei kann man dann durch mehrfaches Auf und Ab pippetieren
die Lösung
auch schon mischen